Хәзерге вакытта сезнең браузерда Javascript сүндерелгән. Javascript сүндерелгән вакытта бу вебсайтның кайбер функцияләре эшләмәячәк.
Үзегезнең конкрет мәгълүматларыгыз һәм кызыксындырган конкрет даруларыгыз белән теркәлегез, һәм без сез биргән мәгълүматны киң мәгълүмат базасындагы мәкаләләр белән туры китерәчәкбез һәм PDF күчермәсен сезгә шунда ук электрон почта аша җибәрәчәкбез.
Ban-Lan-Gen гранулалары тычканнарда декстран натрий сульфаты китереп чыгарган хроник рецидив колитын киметә, эчәк микробиотасын модуляцияләү һәм эчәк SCFA Derived-GLP-1 җитештерүен торгызу юлы белән.
Цзяо Пен,1-3,*Ли Си,4,*Чжэн Лин,3,5 Дуан Лифан,1 Гао Чжэнсян,2,5 Диэху,1 Ли Цзе,6 Ли Сяофэн,6 Шен Сянчунь,5 Сяо Хайтао21Пекин университеты Шэньчжэнь хастаханәсенең фармация бүлеге, Шэньчжэнь, Кытай Халык Республикасы; 2Шэньчжэнь университеты сәламәтлек саклау фәннәре үзәгенең фармация мәктәбе, Шэньчжэнь, Кытай Халык Республикасы; 3Гуйчжоу медицина университетының этник медицина һәм традицион кытай медицинасын үстерү һәм куллану буенча инженерлык технологияләре тикшеренү үзәге Мәгариф министрлыгының Гуйчжоу провинциясенең фармация төп лабораториясе, Гуйчжоу медицина университеты, Гуйян, Кытай Халык Республикасы; 4Гастроэнтерология бүлеге, Пекин университеты Шэньчжэнь хастаханәсе, Шэньчжэнь, Кытай Халык Республикасы; 5Гуйчжоу медицина университетының фармация мәктәбе, дару үсемлекләре функциясе һәм куллану буенча дәүләт төп лабораториясе, Гуйян; 6 Лаборатория медицинасы бүлеге, Пекин университеты Шэньчжэнь хастаханәсе, Шэньчжэнь, Кытай [email protected] Шен Сянчунь, Фармация мәктәбе, Гуйчжоу медицина университеты, Гуйчжоу, Кытай Халык Республикасы, 550004, Электрон почта [email protected] Максат: GLP-1 нигезендәге терапия - ялкынсыну эчәк авыруларын дәвалауның яңа ысулы. Ban-Lan-Gen (BLG) гранулалары - төрле ялкынсыну авыруларын дәвалауда потенциаль ялкынсынуга каршы активлык күрсәтүче билгеле антивируслы TCM формуласы. Ләкин аның колитка ялкынсынуга каршы йогынтысы һәм аның тәэсир итү механизмы әлегә ачык түгел. МЕТОДЛАР: Тычканнарда декстран натрий сульфаты (DSS) китереп чыгарган хроник рецидив колитын билгеләү. BLG-ның саклаучы эффектын бәяләү өчен авыру активлыгы индекслары, җәрәхәтнең гистологик маркерлары һәм ялкынсынуга каршы цитокин дәрәҗәләре үткәрелде. BLG-ның эчәк микробиотасына һәм эчәклегенә йогынтысы сывороткадагы GLP-1 дәрәҗәләре һәм юан эчәк Gcg, GPR41 һәм GRP43 экспрессиясе, эчәк микробиота составы, фекаль SCFA дәрәҗәләре һәм беренчел тычканнан GLP-1 бүленеп чыгу белән характерланды. Юан эчәк эпителиаль күзәнәкләре SCFA-дан алынган GLP-1 җитештерүен тәэмин итә. Нәтиҗәләр: BLG белән дәвалау тән авырлыгын югалтуны, DAI-ны, юан эчәк кыскаруын, юан эчәк тукымаларының зарарлануын һәм юан эчәк тукымаларында TNF-α, IL-1β һәм IL-6 проялинуция цитокиннары дәрәҗәсен сизелерлек киметә. Моннан тыш, BLG белән дәвалау колит тычканнарында юан эчәк Gcg, GPR41 һәм GRP43 экспрессиясен һәм сыворотка GLP-1 дәрәҗәсен сизелерлек торгыза ала, һәм Akkermansia һәм Prevotellaceae_UCG-001 кебек SCFA җитештерүче бактерияләрне арттырып, Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas һәм Oscillibacter кебек бактерияләрнең күплеген киметү юлы белән. Моннан тыш, BLG белән дәвалау колит тычканнары тизәгендә SCFA дәрәҗәсен сизелерлек арттыра ала. Шул ук вакытта, in vitro экспериментлар шулай ук ​​BLG белән дәваланган тычканнарның тизәк экстрактының беренчел кечкенә тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләрен GLP-1 бүлеп чыгаруын сизелерлек стимуллаштыра алуын күрсәтте. Йомгаклау: Бу ачышлар BLG-ның колитка каршы тәэсир итүен күрсәтә. BLG терапия буларак үсеш мөмкинлегенә ия, кимендә өлешчә эчәк микробиотасын модуляцияләү һәм эчәкнең SCFA-дан алынган GLP-1 җитештерүен торгызу юлы белән. Хроник рецидивлы колит өчен өметле дарулар. Ачкыч сүзләр: колит, Ban-Lan-Gen гранулалары, эчәк микробиота, кыска чылбырлы май кислоталары, GLP-1.
Язвалы колит (ЯК) - юан эчәк һәм туры эчәкнең озак вакытлы ялкынсыну авыруы, ул кабатланучы диарея, корсак авыртуы, авырлык кимү һәм лайлалы-иреңле канлы тизәк белән характерлана.1 Соңгы вакытта ЯК таралуы элек аз очраклы илләрдә, шул исәптән Кытайда, Көнбатыш яшәү рәвешенең популярлыгы арту белән арта бара.2 Бу арту җәмәгать сәламәтлеге өчен зур проблемалар тудыра һәм пациентларның эшләү сәләтенә һәм яшәү сыйфатына җитди йогынты ясый. Шунысы игътибарга лаек, ЯК патогенезы күбесенчә ачык түгел, ләкин генетика, әйләнә-тирә мохит факторлары, эчәк микробиотасы һәм иммун системасы ЯК үсешенә өлеш кертә дип гомуми кабул ителә.3 Хәтта хәзер дә ЯКны дәвалау юк, һәм дәвалауның максаты - клиник симптомнарны контрольдә тоту, ремиссияне китереп чыгару һәм саклап калу, лайлалы тышчаның төзәлүен стимуллаштыру һәм кабатлануны киметү. Классик дәвалауга аминосалицилатлар, кортикостероидлар, иммуносупрессантлар һәм биологик препаратлар керә. Ләкин бу препаратлар төрле ян эффектлары аркасында теләгән нәтиҗәгә ирешә алмый.4 Соңгы вакытта күп кенә очракларны өйрәнү традицион кытай медицинасының (ТКМ) зур потенциаль булуын күрсәтте. түбән токсиклык белән яралы колитны бетерүгә ярдәм итә, бу яңа TCM терапияләрен эшләү яралы колитны дәвалау өчен өметле стратегия булуын күрсәтә.
Banlangen Granules (BLG) - Banlangen тамырының су экстрактыннан ясалган традицион кытай медицина препараты.8 Вирусларга каршы нәтиҗәлелегеннән тыш, BLG төрле ялкынсыну авыруларын дәвалауда потенциаль ялкынсынуга каршы активлык күрсәтә.9,10 Моннан тыш, Radix isatidis су экстрактларыннан глюкозинолатлар (R, S-гоитрин, прогоитрин, эпипрорубин һәм глюкозид) һәм нуклеозидлардан (гипоксантин, аденозин, уридин һәм гуанозин) һәм индиго һәм индирубин кебек индиго алкалоидлары аерып алынган һәм билгеләнгән.11,12 Элегерәк үткәрелгән тикшеренүләр аденозин, уридин һәм индирубин кушылмаларының колитның төрле хайван модельләрендә көчле колитка каршы эффект күрсәтүен яхшы документлаштырган.13-17 Ләкин колитта BLG нәтиҗәлелеген бәяләү өчен дәлилләргә нигезләнгән тикшеренүләр үткәрелмәгән. Бу тикшеренүдә без C57BL/6 тычканнарында декстран натрий сульфаты (DSS) китереп чыгарган хроник рецидив колитына BLGның саклау йогынтысын тикшердек һәм ... BLGны авыз аша кабул итү тычканнарда DSS китереп чыгарган хроник рецидивлы юан эчәк ялкынсынуын сизелерлек киметкән, аның көйләү механизмнары эчәк микробиотасын модуляцияләү һәм эчәклектән алынган глюкагонсыман пептид-1 (GLP-1) җитештерүне торгызу белән бәйле.
BLG гранулалары (шикәрсез, NMPA тарафыннан расланган Z11020357; Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd., Пекин, Кытай; партия номеры: 20110966) даруханәләрдән сатып алынган. DSS (Молекуляр авырлык: 36,000–50,000 Далтон) MP Biologicals (Санта-Ана, АКШ) компаниясеннән сатып алынган. Сульфасалазин (SASP) (≥ 98% сафлык), гематоксилин һәм эозин Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, АКШ) компаниясеннән сатып алынган. Тычкан TNF-α, IL-1β һәм IL-6 люминекс Elisa анализ комплектлары R&D системаларыннан (Миннеаполис, Миннесота, АКШ) сатып алынган. Серкә кислотасы, пропион кислотасы һәм май кислотасы Aladdin Industries (Шанхай, Кытай) компаниясеннән сатып алынган. 2-этилмай кислотасы Merck KGaA (Дармштадт, Германия) компаниясеннән сатып алынган.
6-8 атналык ата C57BL/6 тычканнары (гәүдә авырлыгы 18-22 г) Beijing Wetahe Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Пекин, Кытай) компаниясеннән сатып алынды һәм 22 ± 2 °C температурада, 12 сәгать яктылык/караңгы циклда тотылды. Тычканнарга яңа мохиткә күнегү өчен бер атна дәвамында эчәр су белән ирекле тәэмин ителгән стандарт кимерүчеләр диетасы бирелде. Аннары тычканнар очраклы рәвештә дүрт төркемгә бүленде: контроль төркем, DSS модель төркеме, SASP белән дәваланган төркем (200 мг/кг, эчү өчен) һәм BLG белән дәваланган төркем (1 г/кг, эчү өчен). 1А рәсемдә күрсәтелгәнчә, безнең алдагы тикшеренү буенча, безнең алдагы тикшеренү буенча, эксперименталь хроник рецидив колит тычканнарда 5 көн дәвамында 1,8% DSS өч циклы белән, аннары 7 көн дәвамында дистилляцияләнгән су белән индукцияләнде. SASP һәм BLG белән дәваланган төркемнәрдәге 18 тычкан 0 көннән башлап һәр көнне SASP һәм BLG белән дәваланды. Башлангыч экспериментлар буенча, BLG дозасы 1 г/кг итеп билгеләнде. Шул ук вакытта, әдәбият буенча SASP дозасы 200 мг/кг итеп билгеләнде.4 Контроль һәм DSS модель төркемнәре эксперимент дәвамында бер үк күләмдә су алдылар.
1 нче рәсем. BLG тычканнарда DSS китереп чыгарган хроник рецидив колитын яхшырта.(A) Хроник рецидив колитның эксперименталь дизайны һәм дәвалау, (B) тән авырлыгы үзгәрүе, (C) авыру активлыгы индексы (DAI) баллы, (D) юан эчәк озынлыгы, (E) юан эчәкнең репрезентатив рәсеме, (F) H&E буяу юан эчәк (зурлау, ×100) һәм (G) гистологик балл. Мәгълүматлар уртача ± SEM (n = 6) буларак бирелә.##p < 0.01 яки ###p < 0.001 контроль (Con) төркеменә каршы; *p < 0.05 яки **p < 0.01 яки ***p < 0.001 DSS төркеменә каршы.
Тән авырлыгы, тизәк консистенциясе һәм ректаль кан китү көн саен теркәлә барды. Авыру активлыгы индексы (DAI) алдан тасвирланганча тән авырлыгы, тизәк консистенциясе һәм ректаль кан китү балларын берләштереп билгеләнде.19 Эксперимент ахырында барлык тычканнар эвтаназияләнде һәм алга таба экспериментлар өчен кан, тизәк һәм юан эчәк җыелды.
Юан эчәк тукымасы формалин белән фиксацияләнгән һәм парафинга салынган. 5 микронлы кисемтәләр ясалган һәм гематоксилин-эозин (H&E) белән буялган, аннары алдан тасвирланганча ялтыратылган һәм балкып куелган.19
Юан эчәк тукымасының гомуми РНКсы Тризол реагенты (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) ярдәмендә алынды, аннары кДНКны кире транскриптаза белән экстракцияләү үткәрелде (TaKaRa, Kusatsu, Shiga, Япония). Санлы ПЦР SYBR Green Master (Roche, Базель, Швейцария) белән реаль вакытлы ПЦР системасы ярдәмендә башкарылды. Максатлы ген транскриптлары β-актинга нормальләштерелде һәм мәгълүматлар 2-ΔΔCT ысулы ярдәмендә анализланды. Ген праймерлары эзлеклелеге 1 нче таблицада күрсәтелгән.
Беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләрен аеру һәм үстерү элек тасвирланганча башкарылды.20 Кыскасы, 6-8 атналык тычканнарның юан эчәкләре муен чыгу юлы белән корбан ителгәннән соң башта киселде, аннары озынлыгы буенча ачылды, Hanks Balanced Toz эремәсе (HBSS, кальций һәм магнийсыз) белән эшкәртелде һәм 0,5-1 мм вак кисәкләргә киселде. Аннары тукымалар ирекле DMEM мохитендә 0,4 мг/мл коллагеназа XI (Sigma, Poole, Бөекбритания) белән эшкәртелде һәм бүлмә температурасында 300 xg тизлектә 5 минут центрифугаланды. Грунтны DMEM мохитендә (10% феталь сыер сывороткасы, 100 берәмлек/мл пенициллин һәм 100 мкг/мл стрептомицин белән тулыландырылган) 37 °C температурада кабат эретелде һәм нейлон челтәр аша үткәрелде (тишек зурлыгы ~250 мкм). Юан эчәк эпителиаль күзәнәкләренең аликвотлары пыяла төпле савытларга урнаштырылды һәм сиркә кислотасы, пропион кислотасы, май кислотасы һәм тычкан тизәге белән инкубацияләнде. экстрактларны 37°C температурада 2 сәгать, 5% CO2.
Юан эчәк тукымасы PBS белән гомогенлаштырылды, һәм юан эчәк тукымасындагы цитокиннар IL-6, TNF-α һәм IL-1β дәрәҗәләре luminex ELISA анализ комплектлары (R&D системалары, Миннеаполис, Миннесота, АКШ) ярдәмендә ачыкланды. Шулай ук, беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләренең сывороткасында һәм культура мохитендә GLP-1 дәрәҗәләре җитештерүче күрсәтмәләренә туры китереп ELISA комплекты (Bioswamp, Ухань, Кытай) белән билгеләнде.
Тезектән гомуми ДНК ДНК экстракция комплекты (Tiangen, Кытай) ярдәмендә алынды. ДНК сыйфаты һәм күләме 260 нм/280 нм һәм 260 нм/230 нм нисбәтендә үлчәнде. Аннары, һәр алынган ДНКны шаблон буларак кулланып, төрле төбәкләрдә 16S рРНК генының V3-V4 өлкәләрен көчәйтү өчен 338F (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG) һәм 806R (GGACTACHVGGGTWTCTAAT) махсус праймерлары кулланылды. ПЦР продуктлары QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN, Германия) ярдәмендә чистартылды, реаль вакытлы ПЦР ярдәмендә санлаштырылды һәм IlluminaMiseq PE300 секвенирлау платформасы (Illumina Inc., CA, АКШ) ярдәмендә секвенирланды. Биоинформатика анализы өчен мәгълүматларны эшкәртү элек хәбәр ителгән протоколлар буенча башкарылды.21,22 Кыскасы, чимал экспресс файлларын фильтрлау өчен Cutadapt (V1.9.1) кулланылды. OTUлар... UPARSE (7.0.1001 версиясе) ярдәмендә кластерлаштырылган, охшашлык чикләүе 97% тәшкил иткән, һәм химер эзлеклелекләрен бетерү өчен UCHIME кулланылган. Җәмгыять составын анализлау һәм классификацияләү SILVA рибосомаль РНК ген базасына нигезләнгән RDP классификаторы (http://rdp.cme.msu.edu/) ярдәмендә башкарылды.
Кыска чылбырлы май кислоталары (серкә кислотасы, пропион кислотасы һәм май кислотасы) дәрәҗәләре Тао һ.б. тарафыннан элек тасвирланганча, кайбер үзгәрешләр белән үлчәнде.23 Кыскасы, 100 мг тизәк башта 0,4 мл деионизацияләнгән суга суспензияләнде, аннары 0,1 мл 50% күкерт кислотасы һәм 0,5 мл 2-этилмай кислотасы (эчке стандарт) кушылды, аннары гомогенлаштырылды һәм 4°C температурада җылытылды. 12000 әйләнү/мин тизлегендә 15 минут дәвамында C температурада центрифугалау. Өслек катламы 0,5 мл эфир белән экстракцияләнде һәм анализ өчен GC эченә кертелде. Газ хроматографиясе (GC) анализы өчен үрнәкләр ялкын ионизациясе детекторы (FID) белән җиһазландырылган GC-2010 Plus газ хроматографы (Shimadzu, Inc.) ярдәмендә анализланды. Аеру ZKAT-624 колонкасы, 30 м × 0,53 мм × 0,3 мкм (Lanzhou Zhongke Antai Analytical Technology Co., Ltd., Кытай) ярдәмендә башкарылды. Мәгълүматлар GC чишелеш программасы (Shimadzu, Inc.) ярдәмендә алынды. Бүленү нисбәте 10:1, ташучы газ азот, ә агым тизлеге 6 мл/мин иде. Инъекция күләме 1 мкл иде. Инъектор һәм детектор температурасы 300°C иде. Мич температурасы 140°C температурада 13,5 минут тотылды, аннары 250°C кадәр арттырылды. 120°C/мин тизлектә; температура 5 минут дәвамында тотылды.
Мәгълүматлар уртача ± уртачаның стандарт хатасы (SEM) буларак күрсәтелә. Мәгълүматларның әһәмияте берьяклы ANOVA, аннары Дунканның күп диапазонлы тесты ярдәмендә бәяләнде. Барлык исәпләүләр өчен GraphPad Prism 5.0 программасы (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, АКШ) кулланылды һәм p < 0.05 статистик яктан әһәмиятле дип саналды.
Колитның каты корсак авыртуы, диарея һәм кан китү белән бәйле хроник рецидив колит авыруы булуы билгеле. Шуңа күрә, тычканнарда DSS китереп чыгарган хроник рецидив колит BLG-ның колитка каршы нәтиҗәлелеген бәяләү өчен билгеләнде (1А рәсем). Контроль төркем белән чагыштырганда, DSS модель төркемендәге тычканнарның тән авырлыгы сизелерлек кимегән һәм DAI югарырак булган, һәм бу үзгәрешләр BLG белән дәвалауның 24 көненнән соң сизелерлек кире кайткан (1B һәм C рәсемнәр). Юан эчәкнең кыскаруы UC-ның мөһим билгесе. 1D һәм E рәсемнәрендә күрсәтелгәнчә, DSS алган тычканнарның юан эчәк озынлыгы сизелерлек кыскарган, ләкин BLG белән дәвалау җиңеләйгән. Соңрак юан эчәк ялкынсынуын бәяләү өчен гистопатологик анализ үткәрелде. H&E буялган рәсемнәр һәм патологик баллар DSS куллану юан эчәк архитектурасын сизелерлек бозганын һәм крипта җимерелүенә китергәнен, ә BLG белән дәвалау крипта җимерелүен һәм патологик балларны сизелерлек киметкәнен күрсәтте (1F һәм G рәсемнәр). Шунысы игътибарга лаек, BLG-ның 1 г/кг дозада саклаучы эффекты SASP дозасында 200 мг/кг. Бу ачышлар BLG тычканнарда DSS китереп чыгарган хроник рецидив колитның авырлыгын киметүдә нәтиҗәле булуын күрсәтә.
TNF-α, IL-1β һәм IL-6 юан эчәк ялкынсынуының мөһим ялкынсыну маркерлары булып тора. 2А рәсемдә күрсәтелгәнчә, DSS контроль төркем белән чагыштырганда юан эчәктә TNF-α, IL-1β һәм IL-6 геннары экспрессиясенең сизелерлек артуына китергән. BLG куллану бу DSS ярдәмендәге үзгәрешләрне сизелерлек кире кайтара ала. Аннары, без юан эчәк тукымасындагы ялкынсыну цитокиннары TNF-α, IL-1β һәм IL-6 дәрәҗәләрен билгеләү өчен ELISA кулландык. Нәтиҗәләр шулай ук ​​DSS белән дәваланган тычканнарда юан эчәктә TNF-α, IL-1β һәм IL-6 дәрәҗәләренең сизелерлек артуын күрсәтте, ә BLG белән дәвалау бу артуны киметте (2B рәсем).
2 нче рәсем. BLG DSS белән дәваланган тычканнарның юан эчәгендә TNF-α, IL-1β һәм IL-6 ген экспрессиясен һәм ялкынсынуны уятучы цитокиннар җитештерүен тоткарлый.(A) TNF-α, IL-1β һәм IL-6 юан эчәк ген экспрессиясе; (B) TNF-α, IL-1β һәм IL-6 юан эчәк аксымы дәрәҗәләре. Мәгълүматлар уртача ± SEM буларак күрсәтелгән (n = 4–6).#p < 0.05 яки ##p < 0.01 яки ###p < 0.001 контроль (Con) төркеменә каршы; *p < 0.05 яки **p < 0.01 DSS төркеменә каршы.
Эчәк дисбиозы UC патогенезында бик мөһим.24 DSS белән дәваланган тычканнарның эчәк микробиотасын модуляцияләү-модуляцияләмәвен тикшерү өчен, эчәк эчтәлегенең бактерияләр җәмгыятен анализлау өчен 16S рРНК секвенирлавы үткәрелде. Венн диаграммасы өч төркемнең 385 OTU уртаклашуын күрсәтә. Шул ук вакытта һәр төркемнең үзенчәлекле OTUлары бар иде (3А рәсем). Моннан тыш, 3B һәм C рәсемнәрендә күрсәтелгән Chao1 индексы һәм Шеннон индексы BLG белән дәваланган тычканнарда эчәк микробиотасының җәмгыять төрлелеге кимегәнен күрсәтте, чөнки Шеннон индексы BLG белән дәваланган төркемдә сизелерлек кимегән. Өч төркем арасында кластерлаштыру үрнәкләрен билгеләү өчен төп компонент анализы (PCA) һәм төп координат анализы (PCoA) кулланылды һәм DSS белән дәваланган тычканнарның җәмгыять структурасы BLG белән дәваланганнан соң ачык аерылганлыгын күрсәтте (3D һәм E рәсемнәре). Бу мәгълүматлар BLG белән дәвалау DSS белән индукцияләнгән колитлы тычканнарның җәмгыять структурасына сизелерлек йогынты ясаганлыгын күрсәтә.
3 нче рәсем. BLG DSS белән индукцияләнгән колитлы тычканнарда эчәк микробиотасының төрлелеген үзгәртә.(A) OTUның Венн диаграммасы, (B) Chao1 индексы, (C) Шеннонның байлык индексы, (D) OTUның төп компонент анализы (PCA) балл графигы, (E) OTU төп координат анализы (PCoA) баллы. Рәсем. Мәгълүматлар уртача ± SEM буларак күрсәтелгән (n = 6).**p < 0.01 vs. DSS төркеме.
Фекаль микробиоталардагы конкрет үзгәрешләрне бәяләү өчен, без барлык таксономик дәрәҗәләрдә эчәк микробиотасы составын анализладык. 4А рәсемдә күрсәтелгәнчә, барлык төркемнәрдә дә төп филалар Firmicutes һәм Bacteroidetes иде, аннары Verrucomicrobia. DSS белән дәваланган тычканнарның фекаль микроб җәмгыятьләрендә Firmicutes һәм Firmicutes/Bacteroidetes нисбәтләренең чагыштырмача күплеге контроль тычканнар белән чагыштырганда сизелерлек арткан, һәм бу үзгәрешләр BLG белән дәвалаудан соң сизелерлек кире кайткан. Аерым алганда, BLG белән дәвалау DSS белән индукцияләнгән колитлы тычканнарның тизәгендә Verrucobacterium чагыштырмача күплеген сизелерлек арттырган. Өй дәрәҗәсендә фекаль микроб җәмгыятьләрендә Lachnospiriaceae, Muribaculaceae, Akkermansiaceae, Ruminococcaceae һәм Prevotellaceae яшәгән (4B рәсем). DSS төркеме белән чагыштырганда, BLG кимүе Akkermansiaceae күплеген арттырган, ләкин Lachnospiraceae һәм Ruminococcaceae күплеген киметкән. Шунысы игътибарга лаек, ыруг дәрәҗәсендә фекаль микробиотада Lachnospira_NK4A136_group, Akkermansia һәм Prevotellaceae_UCG-001 булган (4C рәсем). Бу ачыш шулай ук ​​BLG дәвалавының DSS проблемасына җавап итеп микробиотаның дисбалансын нәтиҗәле рәвештә кире кайтаруын күрсәтте, бу Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas һәм Oscillibacter кимүе, ә Akkermansia һәм Prevotellaceae_UCG-001 артуы белән характерлана.
4 нче рәсем. BLG DSS белән индукцияләнгән колит тычканнарында эчәк микробиотасының күплеген үзгәртә.(A) Филиум дәрәҗәсендә эчәк микробиотасының күплеге; (B) Гаилә дәрәҗәсендә эчәк микробиотасының күплеге; (C) Токым дәрәҗәсендә эчәк микробиотасының күплеге. Мәгълүматлар уртача ± SEM (n = 6) буларак күрсәтелгән.#p < 0.05 яки ###p < 0.001 контроль (Con) төркеменә каршы; *p < 0.05 яки **p < 0.01 яки ***p < 0.001 DSS төркеменә каршы.
Кыска чылбырлы май кислоталары (SCFA) Akkermansia һәм Prevotellaceae_UCG-001 төп метаболитлары булуын, ә ацетат, пропионат һәм бутират эчәклек куышлыгында иң күп очрый торган SCFA булуын исәпкә алсак, 25-27 без әле дә тикшеренүдә. 5 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, DSS белән дәваланган төркемдә фекаль ацетат, пропионат һәм бутират концентрацияләре сизелерлек кимегән, ә BLG белән дәвалау бу кимүне күбесенчә бастырырга мөмкин.
5 нче рәсем. BLG DSS белән индукцияләнгән колитлы тычканнарның тизәгендә SCFA дәрәҗәсен арттыра.(A) Тешәктә сиркә кислотасы күләме; (B) Тешәктә пропион кислотасы күләме; (C) Тешәктә май кислотасы күләме. Мәгълүматлар уртача ± SEM (n = 6) буларак күрсәтелгән.#p < 0.05 яки ##p < 0.01 контроль (Con) төркеменә каршы; *p < 0.05 яки **p < 0.01 DSS төркеменә каршы.
Без шулай ук ​​нәсел дәрәҗәсендәге дифференциаль SCFA һәм фекаль микробиоталар арасындагы Пирсон корреляция коэффициентын исәпләдек. 6 нчы рәсемдә күрсәтелгәнчә, Akkermansia пропион кислотасы (Pearson = 0.4866) һәм май кислотасы (Pearson = 0.6192) җитештерү белән уңай корреляцияләнгән. Киресенчә, Enteromonas һәм Oscillobacter икесе дә ацетат җитештерү белән тискәре бәйләнештә булган, Пирсон коэффициентлары 0.4709 һәм 0.5104 тәшкил иткән. Шулай ук, Ruminococcaceae_UCG-014 пропион кислотасы (Pearson = 0.4508) һәм май кислотасы (Pearson = 0.5842) җитештерү белән тискәре корреляцияләнгән.
6 нчы рәсем. Дифференциаль SCFA һәм юан эчәк микроблары арасындагы Пирсон корреляция анализы.(A) Энтеромоналар сиркә кислотасы белән; (B) Баш мие селкенү таякчыклары сиркә кислотасы белән; (C) Аккермансия пропион кислотасы белән; (D) Руминококк_UCG-014 пропион кислотасы белән; (E) Аккермансия май кислотасы белән; (F)) Руминококк _UCG-014 май кислотасы белән.
Глюкагонга охшаган пептид-1 (GLP-1) - ялкынсынуга каршы үзлекләргә ия булган проглюкагонның (Gcg) күзәнәк төренә хас пост-трансляция продукты.28 7 нче рәсемдә күрсәтелгәнчә, DSS Gcg мРНК экспрессиясенең сизелерлек кимүенә китерде. Юан эчәк һәм BLG белән дәвалау контроль төркем белән чагыштырганда DSS белән индукцияләнгән Gcg кимүен сизелерлек кире кайтара алды (7А рәсем). Шул ук вакытта, DSS белән дәваланган төркемдә кан сарысуындагы GLP-1 дәрәҗәсе сизелерлек кимеде, һәм BLG белән дәвалау бу кимүне күбесенчә булдырмаска мөмкин иде (7B рәсем). Кыска чылбырлы май кислоталары G-аксым белән бәйләнгән 43 нче рецептор (GRP43) һәм G-аксым белән бәйләнгән 41 нче рецептор (GRP41) активлаштыру аша GLP-1 секрециясен стимуллаштыра алганлыктан, без шулай ук ​​колит тычканнарының юан эчәгендә GPR41 һәм GRP43 тикшердек һәм DSS белән көрәшкәннән соң GRP43 һәм GPR41 юан эчәк мРНК экспрессиясенең сизелерлек кимүен ачыкладык, һәм BLG белән дәвалау бу кимүләрне нәтиҗәле рәвештә коткара алды (7А рәсем). 7C һәм D).
7 нче рәсем. BLG DSS белән дәваланган тычканнарда кан сарысуындагы GLP-1 дәрәҗәсен һәм юан эчәкнең Gcg, GPR41 һәм GRP43 мРНК экспрессиясен арттыра.(A) Юан эчәк тукымасында Gcg мРНК экспрессиясе; (B) Кан сарысуындагы GLP-1 дәрәҗәсе; (C) Юан эчәк тукымасында GPR41 мРНК экспрессиясе; (D) Юан эчәк тукымасында GPR43 мРНК экспрессиясе. Мәгълүматлар уртача ± SEM буларак бирелә (n = 5–6).#p < 0.05 яки ##p < 0.01 контроль (Con) төркеменә каршы; *p < 0.05 DSS төркеменә каршы.
BLG белән дәвалау DSS белән дәваланган тычканнарда кан сарысуындагы GLP-1 дәрәҗәсен, юан эчәкнең Gcg мРНК экспрессиясен һәм фекаль SCFA дәрәҗәсен арттыра алганлыктан, без ацетат, пропионат һәм бутиратны, шулай ук ​​контроль (F-Con), DSS колиты (F-Con) -DSS) һәм BLG белән дәваланган колит (F-BLG) тычканнарында беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләреннән GLP-1 чыгарылуын тикшердек. 8А рәсемдә күрсәтелгәнчә, 2 мМ сиркә кислотасы, пропион кислотасы һәм май кислотасы белән дәваланган беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләре, элеккеге тикшеренүләр белән туры китереп, GLP-1 чыгарылуын сизелерлек стимуллаштырды.29,30 Шулай ук, барлык F-Con, F-DSS һәм F-BLG (0,25 г тизәккә тиң) беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләреннән GLP-1 чыгарылуын сизелерлек стимуллаштырды. Шунысы игътибарга лаек, F-DSS белән дәваланган беренчел тычкан юан эчәк эпителиаль күзәнәкләре тарафыннан чыгарылган GLP-1 күләме F-Con һәм F-BLG белән дәваланган беренчел тычканнарныкына караганда күпкә түбәнрәк иде. юан эчәк эпителий күзәнәкләре. (8B рәсем). Бу мәгълүматлар BLG белән дәвалау эчәкнең SCFA-дан алынган GLP-1 җитештерүен сизелерлек торгызганлыгын күрсәтә.
8 нче рәсем. BLG-дан алынган SCFA тычканның беренчел юан эчәк эпителий күзәнәкләреннән GLP-1 бүленеп чыгуын стимуллаштыра.(A) Серкә кислотасы, пропион кислотасы һәм май кислотасы тычканның беренчел юан эчәк эпителий күзәнәкләреннән GLP-1 бүленеп чыгуын стимуллаштырды; (B) фекаль экстрактлар F-Con, F-DSS һәм F-BLG беренчел тычканның беренчел юан эчәк эпителий күзәнәкләрен стимуллаштырды Бүленеп чыккан GLP-1 күләме. Юан эчәк эпителий күзәнәкләренең аликвотлары пыяла төпле Петри савытларына урнаштырылды һәм 2 мМ сиркә кислотасы, пропион кислотасы, май кислотасы һәм фекаль экстрактлар F-Con, F-DSS һәм F-BLG (0,25 г тизәккә тиң) белән эшкәртелде. 37°C температурада 2 сәгать, тиешенчә 5% CO2. Беренчел тычкан юан эчәк эпителий күзәнәкләреннән бүленеп чыккан GLP-1 күләме ELISA ярдәмендә ачыкланды. Мәгълүматлар уртача ± SEM буларак күрсәтелә (n = 3).#p < 0.05 яки ##p < 0.01 vs. blank яки F-Con; *p < 0.05 vs. F-DSS.
Кыскартулар: Ace, сиркә кислотасы; Pro, пропион кислотасы; ләкин, май кислотасы; F-Con, контроль тычканнарның тизәк экстракты; F-DSS, колит тычканнарның тизәк экстракты; F-BLG, BLG белән эшкәртелгән юан эчәктән. Ялкынсыну тычканнарының тизәк экстракты.
Бөтендөнья сәламәтлек саклау оешмасы тарафыннан рефрактер авыру буларак теркәлгән колит глобаль куркыныч тудыра; Шулай да, авыруны фаразлау, кисәтү һәм дәвалау өчен нәтиҗәле ысуллар әле дә чикләнгән. Шуңа күрә, колит өчен яңа куркынычсыз һәм нәтиҗәле терапевтик стратегияләрне өйрәнү һәм эшләү кирәк. Традицион кытай медицинасы препаратлары өметле вариант булып тора, чөнки гасырлар дәвамында Кытай халкында колитны дәвалауда күп кенә традицион кытай медицинасы препаратлары нәтиҗәле булуы күрсәтелгән, һәм алар барысы да кешеләр һәм хайваннар өчен зыянсыз булган биологик органик һәм табигый материаллар.31,32 Бу тикшеренү колитны дәвалау өчен куркынычсыз һәм нәтиҗәле традицион кытай медицинасы препаратын эзләү һәм аның тәэсир итү механизмын өйрәнүне максат итеп куйды.BLG - гриппны дәвалау өчен кулланыла торган танылган кытай үлән формуласы.8,33 Безнең лабораториядә һәм башкаларда эшләнгән эшләр BLG белән бер үк чималдан эшкәртелгән традицион кытай медицинасы продукты булган индиго кешеләрдә һәм хайваннарда колитны дәвалауда зур нәтиҗәлелек күрсәтүен күрсәтте.4,34 Ләкин BLGның колитка каршы йогынтысы һәм аның йогынтысы Механизм ачык түгел. Хәзерге тикшеренүдә безнең нәтиҗәләр BLGның DSS китереп чыгарган юан эчәк ялкынсынуын нәтиҗәле рәвештә киметүен күрсәтә, бу эчәклекнең модуляциясе белән бәйле. микробиота һәм эчәклектән алынган GLP-1 җитештерүне торгызу.
Билгеле булганча, UC авырлыкны югалту, диарея, ректаль кан китү һәм юан эчәкнең киң таралган лайлалы кабыгына зыян килү кебек типик клиник билгеләре булган рецидив чорлары белән характерлана.35 Шулай итеп, хроник рецидив колит биш көн дәвамында өч цикл 1,8% DSS бирү юлы белән, аннары җиде көн эчәр су белән бирелде. 1B рәсемдә күрсәтелгәнчә, үзгәрүчән авырлыкны югалту һәм DAI баллары хроник рецидив колитның уңышлы индукциясен күрсәтте. BLG белән дәваланган төркемдәге тычканнар 8 нче көннән башлап югарырак торгызылу күрсәттеләр, бу 24 нче көннән сизелерлек аерылып торды. DAI баллында да шул ук үзгәрешләр күзәтелде, бу колитның клиник яхшыруының яхшыруын күрсәтә. Юан эчәк җәрәхәте һәм ялкынсыну статусы ягыннан юан эчәк озынлыгы, юан эчәк тукымасына зыян килү, һәм юан эчәк тукымаларында ген экспрессиясе һәм ялкынсынуны тудыручы цитокиннар TNF-α, IL-1β һәм IL-6 җитештерү дә BLG белән дәвалаудан соң шактый яхшырды. Гомумән алганда, бу нәтиҗәләр BLG тычканнарда хроник рецидив колитны дәвалауда нәтиҗәле булуын ачык күрсәтә.
BLG үзенең фармакологик йогынтысын ничек күрсәтә? Күп санлы элеккеге тикшеренүләр эчәк микробиотасы колит патогенезында төп роль уйнавын күрсәтте, һәм микробиомга нигезләнгән һәм микробиомга юнәлтелгән терапия колитны дәвалау өчен бик җәлеп итүчән стратегия буларак барлыкка килде. Әлеге тикшеренүдә без BLG белән дәвалау эчәк микробиотасы составында сизелерлек үзгәрешләргә китергәнен күрсәттек, бу BLGның DSS китереп чыгарган колиттан саклау эффекты эчәк микробиотасын модуляцияләү белән бәйле булуын күрсәтә. Бу күзәтү эчәк микробиотасы гомеостазын яңадан программалаштыру TCM препаратларының нәтиҗәлелеген аңлау өчен мөһим ысул дигән фикергә туры килә.36,37 Шунысы игътибарга лаек, Akkermansia - эчәклекнең лайла катламында яшәүче Грам-негатив һәм анаэроб бактерия, ул муциннарны тарката, пропион кислотасы җитештерә, бокал күзәнәкләре дифференциациясен стимуллаштыра һәм лайлалы катламның барьер бөтенлеге функциясен саклый.26 Күп санлы клиник һәм хайваннар турындагы мәгълүматлар Akkermansia сәламәт лайлалы катлам белән тыгыз бәйләнештә булуын күрсәтә,38 һәм Akkermansia spp. авыз аша кабул итү. лайлалы тышча ялкынсынуын сизелерлек яхшырта ала.39 Хәзерге мәгълүматларыбыз BLG белән дәвалаудан соң Akkermansia чагыштырмача күплегенең сизелерлек артуын күрсәтә. Моннан тыш, Prevotellaceae_UCG-001 - SCFA җитештерүче бактерия.27 Күп санлы тикшеренүләр күрсәткәнчә, Prevotellaceae_UCG-001 колитлы хайваннарның тизәгендә чагыштырмача аз күплектә табылган.40,41 Хәзерге мәгълүматларыбыз шулай ук ​​BLG белән дәвалау DSS белән дәваланган тычканнарның юан эчәгендә Prevotellaceae_UCG-001 чагыштырмача күплеген сизелерлек арттыра ала икәнен күрсәтә. Киресенчә, Oscillibacter - мезофил, катгый анаэроб бактерия.42 Oscillibacter чагыштырмача күплеге UC тычканнарында сизелерлек арткан һәм IL-6 һәм IL-1β дәрәҗәләре һәм патологик баллар белән сизелерлек уңай корреляцияләнгән дип хәбәр итте.43,44 Шунысы игътибарга лаек, BLG белән дәвалау DSS белән дәваланган тычканнарның тизәгендә Oscillibacter чагыштырмача күплеген сизелерлек киметте. Шунысы игътибарга лаек, бу BLG белән үзгәртелгән бактерияләр иң күп SCFA җитештерүче бактерияләр иде. Күп санлы алдагы тикшеренүләр SCFAларның юан эчәк ялкынсынуына һәм эчәк эпителий бөтенлеген саклауга потенциаль файдалы йогынтысын күрсәттеләр.45,46 Безнең хәзерге мәгълүматларыбыз шулай ук ​​BLG белән дәваланган тычканнарда DSS белән дәваланган тизәктәге SCFA ацетаты, пропионат һәм бутират концентрациясенең шактый артканлыгын күрсәтте. Бергәләп караганда, бу ачышлар BLG белән дәвалауның хроник рецидив колитлы тычканнарда DSS белән китереп чыгарылган SCFA җитештерүче бактерияләрне нәтиҗәле рәвештә көчәйтә алуын ачык күрсәтә.
GLP-1 - нигездә йомшак эчәктә һәм юан эчәктә җитештерелә торган инкретин, ул ашказаны бушавын тоткарлауда һәм ашаганнан соң кан глюкозасын киметүдә мөһим роль уйный.47 Дәлилләр күрсәткәнчә, дипептидил пептидаза (DPP)-4, GLP-1 рецептор агонисты һәм GLP-1 наномедицина тычканнарда эчәк ялкынсынуын нәтиҗәле рәвештә киметә ала.48-51 Элегрәк үткәрелгән тикшеренүләрдә хәбәр ителгәнчә, югары SCFA концентрацияләре кешеләрдә һәм тычканнарда плазмадагы GLP-1 дәрәҗәләре белән бәйле булган.52 Безнең хәзерге мәгълүматлар BLG белән дәвалаудан соң, кан сарысуындагы GLP-1 дәрәҗәләре һәм Gcg мРНК экспрессиясе сизелерлек арткан. Шулай ук, DSS белән дәваланган колит тычканнарының фекаль экстрактлары белән стимуллаштыруга караганда, юан эчәк культураларында GLP-1 секрециясе сизелерлек арткан. SCFAлар GLP-1 бүленеп чыгуга ничек тәэсир итә? Гвен Толхерст һ.б. SCFA GRP43 һәм GPR41 аша GLP-1 секрециясен стимуллаштыра ала дип хәбәр ителде.29 Хәзерге мәгълүматларыбыз шулай ук ​​BLG белән дәвалау DSS белән дәваланган тычканнарның юан эчәгендә GRP43 һәм GPR41 мРНК экспрессиясен сизелерлек арттыра икәнен күрсәтә. Бу мәгълүматлар BLG белән дәвалау GRP43 һәм GPR41не активлаштыру юлы белән SCFA белән стимуллаштырылган GLP-1 җитештерүен торгыза ала дип фаразлый.
BLG - Кытайда озак вакыт рецептсыз сатыла торган (OTC) дару. Куньмин тычканнарында BLGның максималь түземле дозасы 80 г/кг тәшкил итә, һәм кискен токсиклык күзәтелмәгән.53 Хәзерге вакытта кешеләрдә BLGның тәкъдим ителгән дозасы (шикәрсез) көненә 9-15 г (көненә 3 тапкыр). Безнең тикшеренү күрсәткәнчә, 1 г/кг дозада BLG тычканнарда DSS китереп чыгарган хроник рецидив колитын яхшырта. Бу доза клиник кулланылган BLG дозасына якын. Безнең тикшеренү шулай ук ​​аның тәэсир итү механизмы, ким дигәндә өлешчә, эчәк микробиотасында үзгәрешләр, аерым алганда, Akkermansia һәм Prevotellaceae_UCG-001 кебек SCFA җитештерүче бактерияләр, эчәклектән алынган GLP-1 җитештерүен торгызу белән бәйле булуын ачыклады. Бу ачышлар BLG клиник колитны дәвалау өчен потенциаль терапевтик агент буларак алга таба карарга лаеклы икәнен күрсәтә. Ләкин, аның эчәк микробиотасын модуляцияләүнең төгәл механизмы микробиоталар җитмәгән тычканнар һәм фекаль бактерияләр трансплантациясе белән расланырга тиеш.
Ас, сиркә кислотасы; ләкин, май кислотасы; BLG, пандан; DSS, декстран натрий сульфаты; DAI, авыру активлыгы индексы; DPP, дипептидил пептидаза; FID, ялкын ионизациясе детекторы; F-Con, контроль Тычканнарның фекаль экстрактлары; F-DSS, DSS колит тычканнарының фекаль экстрактлары; F-BLG, BLG белән дәваланган колит тычканнарының фекаль экстрактлары; GLP-1, глюкагонсыман пептид-1; Gcg, глюкагон; газ хроматографиясе, газ хроматографиясе; GRP43, G аксымы белән бәйләнгән рецептор 43; GRP41, G аксымы белән бәйләнгән рецептор 41; H&E, гематоксилин-эозин; HBSS, Hanks' Balanced Toz эремәсе; OTC, OTC; PCA, төп компонент анализы; PCoA, төп координат анализы; Pro, пропион кислотасы; SASP, сульфасалазин; SCFA, кыска чылбырлы май кислоталары; Кытай медицинасы, традицион кытай медицинасы; Яралы колит, җәрәхәтле колит.
Барлык эксперименталь протоколлар да Пекин университетының Шэньчжэнь-Гонконг фән һәм технология университеты медицина үзәгенең (Шэньчжэнь, Кытай) Хайваннар этикасы комитеты тарафыннан Институциональ күрсәтмәләр һәм Хайваннар кагыйдәләренә (этика номеры A2020157) туры китереп расланган.
Барлык авторлар да концепция һәм дизайнга, мәгълүмат җыюга яки мәгълүматларны анализлауга һәм интерпретацияләүгә зур өлеш керттеләр; мәкалә проектын әзерләүдә яки мөһим интеллектуаль эчтәлекне тәнкыйди яктан карап чыгуда катнаштылар; кулъязманы хәзерге журналга тапшырырга ризалаштылар; версиясен бастыру өчен расладылар; Эшнең барлык аспектлары өчен дә җаваплы булдылар.
Бу эш Кытайның Милли табигать фәннәре фонды (81560676 һәм 81660479), Шэньчжэнь университетының беренче класслы проекты (86000000210), Шэньчжэнь фән һәм технологияләр инновация комитеты фонды (JCYJ20210324093810026) һәм Гуандун провинциясенең медицина фәне һәм технологияләре тикшеренү фонды (A2020157 һәм A2020272), Гуйчжоу медицина университеты даруханәсе, Гуйчжоу провинциясенең төп лабораториясе (YWZJ2020-01) һәм Пекин университеты Шэньчжэнь хастаханәсе (JCYJ2018009) тарафыннан хупланды.
1. Тан Б, Чжу Дж, Чжан Б һ.б. Тычканнарда декстран натрий сульфаты белән китереп чыгарылган эксперименталь колитта триптолидның ялкынсынуга каршы агент буларак терапевтик потенциалы. pre-immune.2020;11:592084.doi: 10.3389/fimmu.2020.592084
2. Каплан Г.Г. IBDның глобаль йөге: 2015 елдан 2025 елга кадәр. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2015; 12: 720–727.doi: 10.1038/nrgastro. 2015.150
3. Пенг Дж., Чжэн Т.Т., Ли Сюэ һ.б. Үсемлекләрдән алынган алкалоидлар: ялкынсынулы эчәк авыруларында өметле авыру модификаторлары. Префармакология. 2019; 10:351.doi:10.3389/fphar.2019.00351
4. Сяо Хайтен, Пен Цзе, Вен Б һ.б. Indigo Naturalis тычканнарда DSS китереп чыгарган колитта юан эчәкнең оксидлашу стрессын һәм Th1/Th17 реакцияләрен тоткарлый. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 9480945. doi: 10.1155/2019/9480945
5. Чен М, Динг Й, Тонг З. Кытай үлән дарулары Sophora flavescens (Sophora flavescens) ның җәрәхәтле колитты дәвалауда нәтиҗәлелеге һәм куркынычсызлыгы: клиник дәлилләр һәм потенциаль механизмнар. Префармакология. 2020; 11:603476.doi:10.3389/fphar.2020.603476
6. Цао Фан, Лю Цзе, Ша Бенсин, Пан ХФ. Табигый продуктлар: эчәк ялкынсынуын дәвалау өчен эксперименталь яктан нәтиҗәле дарулар. Curr Pharmaceuticals. 2019; 25: 4893–4913. doi: 10.2174/1381612825666191216154224
7. Чжан С, Цзян М, Лу А. Традицион кытай медицинасы белән яралы колитны адъювант дәвалау турында уйланулар. Клиник рев. Аллергиягә каршы иммунизация. 2013; 44: 274–283.doi: 10.1007/s12016-012-8328-9
8. Ли Чжунтен, Ли Ли, Чен ТТ һ.б. Сезонлы гриппны дәвалауда Банланген гранулаларының нәтиҗәлелеге һәм куркынычсызлыгы: очраклы контрольдә тотылган сынау өчен тикшеренү протоколы. trial.2015;16:126.doi: 10.1186/s13063-015-0645-x